СЫВОРОТКИ


СЫВОРОТКИ
СЫВОРОТКИ. С. и м м у и н а я—сыворотка, полученная из крови животного, иммунизированного естественно или искусственно к данному антигену (в большинстве случаев—болезнетворному микроорганизму), и обладающая в отношении его строго специфическим избирательным действием. Понятие «иммунная С.» нужно признать относительным, т. к. оно с качественной стороны связано со строгой специфичностью действия иммунных свойств, а в количественном отношении без резких границ переходит в понятие «нормальной сыворотки». •Сыворотка высокоактивная и следовательно иммунная по отношению к одному возбудителю может являться совершенно недеятельной, -следовательно «нормальной» по отношению к другим микробам. Противопоставление понятия С. иммунной понятию нормальной С. наталкивается, кроме того, на неопределенность тех границ иммунной активности, выше которых сыворотка признается «иммунной», а ниже—«нормальной» Степень специфической иммунной активности •сыворотки может быть весьма различна в зависимости от силы и длительности иммунизаторно-го раздражения, а также от физиол. состояния организма, подвергающегося иммунизации (колебания иммунитета при голодании, утомлении, охлаждении, кровопотерях и т. п.). В ряде случаев очень трудно сказать, с какого момента С. может считаться «иммунной». Так, количество дифтерийного антитоксина может достигать у искусственно иммунизированных лошадей огромных цифр в 5 000 ед. в 1 см3 С, а у животных, иммунизировавшихся естественным путем, оно может равняться всего лишь Vmno антитоксической единицы в 1 си3, следовательно быть в 5 млн. раз меньше указанного выше титра. Поскольку и в том и в другом случае мы имеем специфический антитоксин, т. е. фактор, характеризующий иммунность С, мы должны назвать обе С. «иммунными». Ограничение понятия «иммунной сыворотки» условием искусственной иммунизации животного также не выдерживает критики, поскольку и при искусственной и при естественной иммунизации природа иммунных свойств С. остается одной и той же и поскольку в том же примере дифтерии встречаются жрчотные(лошади),в естественном .состоянии содержащие до 10 и даже 20 ед. дифтерийного антитоксина в 1 смг С, а с другой стороны, лошади, искусственно иммунизированные недостаточно активным дифтерийным антигеном, нередко дают С. титром в 25—50 антитоксических единиц в 1 см3. В практическом смысле термин «иммунная сыворотка» принято употреблять в отношении С, полученных от искусственно иммунизированных животных. Классификация. По признаку практического предназначения «иммунные С.» делятся на два вида—диагностические (см. ниже) и лечебно-профилактические. По существу своему лечебное и профилактическое действие сыворотки тождественно. Оно зависит от одних и тех же защитных свойств С, однако имеется ряд С, дающих ясно выраженный постоянный эффект при профилактическом применении и не приносящих почти никакой пользы при лечении уже развившегося заболевания (коревая реконвалесцентная сыворотка Дегквица, в значительной мере и столбнячная сыворотка). По отношению к таким сывороткам можно было бы признать целесообразным применение термина «профилактическая С», а способ их применения—«серовакцинацией». В дальнейшем лечебные С. и профилактические в виду тождественности их активного начала будут рассматриваться совместно. Наоборот, различия между диагностическими и лечебно-профилактическими С. весьма существенны. К обоим этим видам С. прилагаются и совершенно различные требования. Достаточно указать, что первые предназначаются преимущественнодляреа-кций in vitro (в пробирке), а вторые—для защитного действия в условиях живого организма (in vivo). В силу этого лечебные С. в отличие от диагностических должны удовлетворять целому ряду специальных технических требований, как-то: строгая стерильность, выдержанность, полная безвредность и т. д. По характеру своих иммунных свойств лечебные С. являются преимущественно антитоксическими и бактерицидными, тогда как диагностические—аглютинирующими, преципитирующими и т. д. Это не исключает однако совпадения в нек-рых случаях и диагностических и лечебных свойств в одной и той же С. Отличия иммунных сывороток от нормальных. Самое главное и существенное отличие иммунной С. от нормальной заключается в ее специфическом действии на антиген. Формы биол. и физ.-хим. действия иммунных С. на антиген весьма многообразны и обозначаются целым рядом искусственно установленных в иммунологии терминов, в большинстве случаев характеризующих внешнее проявление процесса, которое зависит не только от свойств С., но и от характера самого антигена. Таковы антитоксические, бактерицидные, бактериолитические, аглютинирующие, пре-ципитирующие, опсонизирующие и т. д. свойства иммунных С, к-рые по старому учению Эрлиха зависят о г наличия в С. соответствующих хим. веществ (антитоксины, бактериолизины, аглютинины, преципитины, опсонины и т. д.). Многочисленнейшие попытки выделить эти вещества в химически чистом виде не увенчались успехом, так что говорить о них как о новых химически обособленных веществах, появляющихся в иммунной С. и отсутствующих в нормальной, пока мы не имеем права. Более вероятным является воззрение на специфические свойства иммунных С. как на новые свойства сывороточного белка, приобретенные им в результате иммунизации. Исследования, направленные к выяснению отличия иммунной С. от нормальной в отношении обычных составляющих сыворотку хим. веществ, также не выявили никаких постоянных и характерных особенностей иммунных С. Единственно доказанным, существенными частым химическим изменением, происходящим в С. в процессе иммунизации, является факт значительного увеличения содержания глобули-новой фракции белка, а также и некоторое незначительное увеличение общего белка С. Однако это увеличение количества глобулинов отнюдь нельзя признать специфическим и тесно связанным с накоплением в С. антител. Оно не соответствует нарастанию титра С. и является, как считает большинство авторов, неспецифической реакцией крови на раздражение ' организма усиленной иммунизацией и может быть вызвано целым рядом других воздействий на животное (инъекциями всевозможных веществ, кровопусканиями, воспалительной реакцией и т. д.). С другой стороны, осторожно проведенной иммунизацией можно получить высокого титра С. без нарастания количества глобулинов. Т. о. и эта особенность состава иммунных С. не может быть признана характерной и специфической для них.—'Более специфическим можно признать доказанное Рейтштетте-ром (Reitstotter) и другими физ.-хим. различие между псевдоглобулинами нормальной и антибактериальной С, с одной стороны, и антитоксической иммунной—с другой. Различие это выражается в более сильном «сенсибилизирующем» и менее сильном «защитном» действии иммунного антитоксического псевдоглобулина на гидрофобные коллоиды (коллоидная гидроокись железа). Есть указания на большую гидрофобность и иммунного глобулина. Указанные некоторыми авторами изменения физ.-хим. состояния иммунных С. (поверхностное натяжение, вязкость, формол-желатинизация), как и увеличение процентного содержания псевдоглобулинов, непостоянны. Эти изменения обнаруживаются в большинстве случаев в течение иммунизации и исчезают с ее прекращением. Отчасти они обусловлены неспецифическим увеличением общего белка в процессе иммунизации. Некоторые объясняют иммунную активность псевдогл.обулина его большей дисперсностью. Авторы, изучавшие состав электролитов С, также не открыли никаких определенных закономерных отношений между ними и иммунными свойствами С. Исследования по определению общих количеств различных неорганических веществ—Са, К, Na, P и др.,—по их распределению между различными фракциями белков С. и степени связанности с ними (диффузибельность) не дали никаких определенных фактов, характерных для иммунных С, хотя нек-рым исследователям отдельные закономерные соотношения и представлялись доказанными. Незначительная выраженность этих различий, отсутствие всякой специфичности и противоречивые данные проверочных работ позволяют заключить, что до сих пор никаких закономерных, характерных и общепризнанных различий в хим. составе между иммунной и нормальной С. нет, за исключением вышеуказанного относительного и непостоянного увеличения количества глобулинов. Это не значит конечно, что с усовершенствованием и развитием методов физ. и хим. исследования более тонкие методы не откроют нам неизвестных до сих пор особенностей хим. состава или физ.-хим. состояния иммунных сывороток. Можно думать однако, что такая возможность невелика, поскольку главным носителем специфических иммунных реакций С. является сложная белковая молекула с ее огромным разнообразием химических и физических комбинаций. Серология. Вопросы, связанные с выработкой С, их экспериментальным изучением и клин, применением, составляют предмет «науки о сыворотках»—серологию. Охватывая всю область иммунитета, посвященную' сывороточному делу, серология работает над выяснением сущности лечебного действия иммунных С, над принципами и способами изготовления новых и повышения активности уже существующих С. Теоретическая разработка и практическое приложение достижений серологии осуществляются в специальных сывороточных ин-тах (или сывороточных отделах бактериол. ин-тов), где препараты лечебных С. вырабатываются в массовом, фабричном масштабе и откуда, они поступают в б-цы. Успехи серологии за 40 лет ее существования велики, многие сотни тысяч людей обязаны ей жизнью или облегчением страданий, однако еще очень большие и сложные проблемы стоят перед пей неразрешенными. Выяснение ближайшего механизма действия различных лечебных С, всех условий, влияющих на успешность их применения, разработка методов изготовления наиболее активных С, вопросы их экспериментального титрования (пока не существующего для многих антибактериальных С.) и изучение степени соответствия лечебного действия С. с экспериментально установленным титром—таковы в самых кратких и общих чертах задачи, стоящие перед серологией и представляющие широкое поле для дальнейшей исследовательской деятельности. Л е ч е б н о-п рофилактические С. Как сказано выше, нет никакого различия по существу между С, употребляемыми для лечебных и для профилактических целей. И в том и в другом случае защитное действие таких С. обусловливается одними и теми же антителами.—К лассификация. Способы приготовления лечебных, resp.профилактических, С. различны, они зависят прежде всего от патогенеза данной инфекции. По способу приготовления и свойствам различаются три типа С: антитоксические, антибактериальные и смешанные. Первый тип чисто антитоксических С. применяется при заболеваниях чисто токсического характера (дифтерия, столбняк, ботулизм, змеиный яд и др.). При приготовлении этих С. для гипериммунизации животных употребляются препараты токсина и его дериватов (анатоксин, смеси с антисывороткой и др.). Иммунизация ведется подкожно или внутримышечно. Титруется сила сывороток по токсину. — Антибактериальные С. получаются иммунизацией животных бактериальными телами в виде или живых или убитых культур (вакцины всякого рода—убитые прогреванием. формалином и т. д.). Иммунизация ведется по преимуществу внутривенно. Титрование таких С. представляет большие трудности и для большинства из них общепринятой методики титрования нет. В тех случаях, где такое титрование имеется, оно основано на принципе защиты организма животного от определенной дозы культуры установленной вирулентности (пневмококк). Титрация in vitro (аглютинация) имеет весьма относительное зналение. К антибактериальным С. принадлежат пневмококковая, стафилококковая, гонококковая, отчасти стрептококковая и нек-рые другие. Весьма трудно исключить возможность наличия в антибактериальных С, главными антителами которых считаются бактериолизины, бактерицидных веществ, опсонипов и др. также антитоксических факторов. Поскольку понятие «токсин», расчленявшееся ранее на эндо- и экзотоксин, оказалось весьма сложным и условным, постольку нельзя исключить участия при иммунизации лошади бактериями также и связанного с их телами или имеющегося в окружающей жидкости, недоступного пока нашему наблюдению токсического элемента. Работы последнего времени (Ferry, Norton a. Steele) по отношению напр. к менингококку, считавшемуся типичным нетоксическим микробом, доказывают,что путем иммунизации лошадей фильтратами бульонных культур менингококка можно получить весьма активные лечебные С. Для лечения инфекций смешанного бактериально-токсического характера изготовляются смешанные С. (дизентерия, скарлатина, газовая гангрена и др.). Иммунизация ведется или на одной и той же лошади двумя различными препаратами (токсин, resp. его дериваты подкожно и культура внутривенно), или их смесью (тотальная культура или тотальный анатоксин Рамона), или же на разных лошадях отдельно каждым препаратом, причем полученная С. впоследствии смешивается. Титрование производится или с препаратом также смешанного типа (дизентерия) или с препаратами доминирующего для патогенеза инфекции фактора (токсины для микробов гангренозной группы и скарлатины, культура для стрептококков и т. д.). В нек-рых случаях, когда трудно определить, каков (токсический иди бактериальный) характер данной инфекции, соответственно сильно колеблются способы и методы изготовления и титрования С. против нее, что делает изложенную классификацию С. условной, однако в общем этаклассификацияцелесообразна, как характеризующая основные требования к С. и принципы ее изготовления. Основание сывороточному лечению инфекционных болезней положили работы Беринга и Вернике (Wernicke) над пассивным иммунитетом. Доказав возможность передачи иммунитета путем парентерального введения С. иммунного животного, Беринг и Вернике приготовили в 1892 г. первую иммунную противодифтерийную С. гипериммунизацией баранов и применили ее для лечения дифтерии у людей. Вскоре затем Ру и Шайу (Chaillou, 1894) изготовили дифтерийную С. на лошади. На протяжении следующих 10—15 лет были изготовлены С. против целого ряда инфекций. Крупными этапами в развитии серологии за 40 лет ее истории следует считать: 1) приготовление столбнячной С. (1894), менингококковой С. (1906), скарлатинозной С. (1904), дизентерийной С. (1904), противогангренозных С. (1916); 2) разработка Эрлихом точного экспериментального способа оценки силы дифтерийной С. с установлением стандарта С; 3) видоизменение этого способа Ремером в 1912 г. (внутрикожное испытание); 4) разработка такого же метода титрования те-танической С. (установление международной единицы столбнячной С. в 1922); 5) введение в практику иммунизации нейтральных смесей в 1914 году; 6) введение в практику иммунизации анатоксина (см.) Районом в 1922 г.; 7) разработка и применение метода титрации С. (дифтерийной) in vitro (флокуляция) Районом в 1922 г.; 8) введение в практику иммунизации неспецифических стимулирующих веществ— хлористого марганца (Walbnm, 1924), тапиоки (Рамон, 1923), квасцов (Glermy, 1931) и хлористого кальция (Рамон, 1932); 9) введение искус- ственной концентрации и очищения С.—Лечебные сыворотки изготовляются в наст, время в специальных производственных сывороточных институтах или в сывороточных отделах бакте-риол. институтов. Наиболее подходящим животным для массового изготовления лечебных С. являются лошадь и близкие к ней виды—мулы, ослы. Крупный рогатый скот (волы, быки, коровы) также иногда используются, однако все преимущества технического порядка (по условиям ухода, иммунитетной реактивности, размерам тела и т. д.) на стороне лошадей, и рогатый скот употребляется очень редко для снабжения б-ц С. в целях лечения субъектов, подозрительных на анафилактическое состояние по отношению к лошадиному белку (повторные случаи сывороточного лечения). Для первых опытов с какой-либо С. часто унотребляютсямелкиеживотные— козы, бараны. В ветеринарной практике используются иногда также свиньи. Предназначенные для изготовления С. животные должны быть сильными и здоровыми в отношении инфекционных б-ней, что гарантируется обязательным 2—4-недельным карантином при поступлении их на конюшню. Хрон. скрытые инфекции должны быть исключены наиболее чувствительными способами биологич. диагностики (маллеинизация, туберкулинизация). Для некоторых иммунизации берутся лошади, естественным образом несколько проиммунизировав-шиеся к данной болезни (дифтерия) или искусственно заранее (за 1/2—1 год) к иммунизации подготовленные (столбняк). Животные подвергаются длительной иммунизации (см. Иммунизация, Гипериммунизация) антигенными препаратами данного микроба. Антигены. Бактериальные препараты, к-рыми иммунизируются животные при изготовлении лечебных С.—антигены,—'Являются важнейшим решающим фактором в иммунизации. Строгая специфичность и высокие иммунизирующие свойства (т. н. антигенность, антигенная сила или антигенная ценность)—вот два главнейших требования, к-рым должны удовлетворять эти препараты. В целях облегчения иммунизации весьма желательно, чтобы применяемые антигены были по возможности свободны от токсического действия на организм иммунизируемого животного.Первое условие— специфичность антигенов—соблюдается путем строгого микробиологического и серологического отбора штаммрв, употребляемых для их изготовления. Очень важно при этом выпускать в практическую иммунизацию не только точно идентифицированные лабораторные штаммы, но также и местные штаммы, выделенные от заболеваний в данной местности (менингококк, стрептококк и др.). Для обезвреживания антигенов применяются различные способы уменьшения или разрушения их токсичности. Главнейшими из этих способов являются: форма-линизация (анатоксины и анавакцины), смешение антигенов со специфической антисывороткой (нейтральные смеси, сенсибилизированные вакцины), умерщвление бактерий нагреванием (вакцины) и т. д. Особо важная роль в вопросе успешности иммунизации принадлежит антигенной силе препарата. Главнейшие усилия серологов направлены именно на повышение антигенной активности иммунизационных препаратов. Прочим факторам иммунизации, как-то индивидуальности животного, схеме иммунизации и т. д., принадлежит меньшее зна- 16S чение. Много работ проделано для изыскания объективных методов определения антигенной силы препаратов. Значительные успехи при зтом достигнуты в области токсинов, особенно дифтерийного токсина и его деривата— анатоксина и др. Кроме ряда методов, предложенных для определения антигенности на животных (определение антитоксин-связываю-щей способности, иммунитетный индекс Глен-ни, прямые опыты иммунизации), в отношении токсина дифтерии и нек-рых других препаратов имеется весьма ценный и легкий метод определения антигенной силы in vitro при помощи реакции флокуляции Района. Для повышения иммунизирующей силы антигенов предложены и употребляются методы искусственной концентрации их путем осаждения к-тами, нейтральными солями, гидроокисью алюминия, флокуляцией со специфической С. с последующим разрушением антитоксина и освобождением анатоксина («регенерация» Района) и т. д. В целях стимуляции процесса антитедооб-разования и изменений в выгодную для- им-мунизатора сторону условий рассасыванияпре-парата в практике гипериммунизации животного довольно широко применяются неспецифические химические вещества-раздражители, как-то тапиока (Рамон), хлористый марганец (Вальбум), квасцы (Гленни), хлористый кальций (Рамон) и др. Ббльшая часть этих веществ употребляется в смеси с антигеном, некоторые (хлористый марганец и др. соли марганца)—раздельно от него. Взятие крови (рис. 1). После нек-рого периода («курса») иммунизации С. животного приобретает достаточную специфич. активность

Рисунок 1. Взятие крови из ушной вепы кролика.

по отношению к антигену, в чем легко убедиться путем предварительного титрования взятой у лошади пробы крови. Тогда животное подвергается большому производственному кровопусканию (из вены). После первого курса иммунизации следует второй, третий и т. д. Каждый курс заканчивается новым кровопусканием. В некоторых случаях бывает выгодно лошадь обескровить целиком, т. е. произвести так наз. тотальное (артериальное) кровопускание. При частичном кровопускании после каждого курса кровь берут один или два раза (с промежутком в двое суток). Количество взятой крови равняется приблизительно Vso веса тела животного, т. е. для лошади весом 450 кг— 8—9 л. При двойных кровопусканиях одно делается уменьшенным на 2—3 л. Технически частичное кровопускание производится путем пункции яремной вены при помощи широкой (6—7 мм) полой иглы или троакара (рис. 2), к-рые через надетую на них резиновую трубку со стеклянной канюлей на конце соединяются

Рисунок 2. Иглы для иммунизации и взятия крови от лошадей.

со специальным стеклянным сосудом, куда и собирается кровь. Тотальное (смертельное) обескровливание производится путем секции сонной артерии, в центральный конец к-рой вставляется стеклянная трубка, также соединенная резиновой труб-                                        ^^ ^ кой с принимающим кровь сосудом. Форма и устройство сосудов, в которые собирается кровь, различны в разных институтах.Наиболее распространены весьма удобные в техническом отношении высокие стеклянные цилиндры—банки вместимостью в несколько (2—4) литров. Для увеличения выхода С. широко употребляются методы отпрессовыва-ния сгустков свернувшейся в цилиндрах крови при помощи грузов из неокисляющихся металлов весом около 1 кг, моптируемых заранее под крышкой цилиндра таким образом, что они легко могут быть опущены в сосуд без открывания его. Иногда такие грузы стерилизуются отдельно от цилиндра и вносятся в него стерильно извне. Отделение С. Взятую в цилиндры кровь оставляют для свертывания на 12—24 ч., затем опускают упомянутые грузы и после 1—2-су-точного содержания цилиндров в холодной комнате откачивают отстоявшуюся над сгустком (покрытым грузом) С. через сифон в 6— 10-литр. бутыль путем разрежения в ней воздуха (рис. 3). В содержащую С. бутыль сейчас же прибавляют соответствующее количество какого-либо консервирующего хим. вещества (см. ниже). Все манипуляции с кровью и С,., от кровопускания до разливки С. по ампулам, должны производиться строго стерильно. В тех случаях, когда С. предназначается для очищения и концентрации, кровь берется в сосуды, содержащие растворы веществ, предотвращающих свертывание крови (обычно лимоннокислый или щавелевокислый натрий). После отстаивания форменных элементов (сгустка не образуется) плазма откачивается и через некоторое время идет в дальнейшую обработку— очищение от-пассивных, не несущих антитоксина фракций белка. В нек-рых случаях в концентрацию берется С, полученная путем свертывания крови.—Объем получаемой из крови С. зависит от технических условий ее отделения (применение б. или м. удачной формы сосудов, формы и веса грузов, от чистоты сосудов, предотвращающей прилипание сгустка к стенкам, и т. д.), а также и от состояния животного в момент взятия от него крови. Обычные физиол. колебания соотношения С. (resp. плазмы) к форменным элементам незначительны и не влияют существенно на промышленный выход С, равный в среднем 40%. Наиболее существенное влияние в этом отношении оказывает состояние анемичности, острой или хронической, развивающейся в результате повторныхимного-кратных кровопусканий. Так, при повторении кровопускания через 2 суток выход С. при вто- J«7 ром кровопускании на 7—10% больше, чем при первом. Длительно эксплоатируемые лошади вследствие анемии и гидремии дают гораздо больший выход С. (50—60% и до 70% общего объема крови), чем свежие, недавно поступившие лошади (25—30% объема крови). Как уже упомянуто, к собранной в бутыли С. прибавляются для предохранения от загрязнения микробами консервирующие антисепти- Рисунок

3. Отсасывание сыворотки из цилиндров в бутыли с сифоном.

ческие вещества. Наичаще употребляются хлороформ (pro narcosi), фенол, хинозол, трикре-зол и некоторые патентованные препараты. Нативпая, не измененная С. подвергается обязательной выдержке в бутылях на леднике (+2----Ь6°) в течение не менее 4 месяцев.Такое выстаивание имеет своей целью: во-первых физ. просветление С, "^вобождение ее от взвешенных Рисунок 4. Прибор для прогревания сывороток. П1 «рменных элементов; во-вто-| | IX исчезновение того токсиче-! ого действия, к-рое оказывает ежая лошадиная С. на чело-I ческий организм; в-третьих ~*ТУ* ,i 1        геныиение явлений сывороточ- 11        а I        й болезни при применении данной С; в-четвертых стабилизацию титра, к-рый в большей мере ослабевает в первые мееяцы хранения С., чем в дальнейшем.В отношении последних двух обстоятельств выдержка С. до нек-рой степени может бьггь заменена ее прогреванием (56° несколько раз по 1 часу) (рис. 4); прогревание, уменьшая явления сывороточной б-ни, не может однако ускорить процесса физ. отстаивания С, так что нек-рый срок для отстаивания (2 месяца) обязателен для нативной лошадиной С. при всех условиях. Выстоявшаяся С. проверяется на стерильность (аэробно и анаэробно), на безвредность (путем впрыскивания 10 см? под кожу нормальной морской свинке) и на ее преципитирующее действие на человеческий белок, а также подвергается специфическому титрованию для определения содержания в ней антител. Многие виды С. имеют свой б. или м. обоснованный и разработанный способ титрования, но ряд С. пока таких способов не имеет. В преобладающем большинстве титрование производится путем опытов на животных. Принцип титрования—определение по точно установленной опытной дозе токсина или культуры того наименьшего количества С., которое, будучи смешано с этой дозой, защищает опытное животное от смерти или заболевания данной б-ныо (способы титрования—см. Стандартизация, стандартизация бактерийных препаратов). Кроме титра антител, определенному в «единицах», в настоящий момент, после работ Мадсена (Madsen) и его школы, придают большое значение определению т. н. авидности С, т. е. степени быстроты, с к-рой вступает С. в реакцию нейтрализации токсина, определяемой опытами на кроликах. Прошедшая все описанные виды проверки и титрования С. в виде пробы каждой серии (три ампулы по 5—10 см?) отправляется на гос. контроль в Гос. ин-т контроля сывороток и вакцин (Москва), который повторяет проверку и выдает формальное разрешение на выпуск С. в употребление. Гос. контроль лечебных С. в СССР обязателен. Серия С, полностью законченная проверкой и имеющая от контрольного ин-та разрешение на выпуск для практического применения, разливается из бутыли по флаконам, в большинстве случаев по ампулам различной емкости (от 2—3 см3 до 20—50 еж3, преимущественно же в 10 см3). Разливка производится сифоном в строго стерильных условиях с фильтрацией С. через стеклянную вату и с точным отмериванием количества, для чего разливательный сифон имеет соответственное устройство. При разливке снова производится бактериологическая проверка С. на ее стерильность. Немедленно после наполнения С. ампула запаивается на сильном остром пламени, затем после просмотра на прозрачность укладывается в отдельную коробочку с наставлением о способе употребления. На самую ампулу наклеивается перед ее укладкой узкая этикетка с обозначением рода С. Коробочка заклеивается второй этикеткой, содержащей следующие сведения (по законодательству СССР): полное наименование и адрес изготовившего С. ин-та, название С, количество единиц и объем помещающейся в ампуле С, номер серии, дата выпуска и номер разрешения Гос. контрольного института. Требования, каким должны у д о в л е т в о р я т ь 'лечебные С. Отпускаемые для употребления в человеческой практике лечебные С; должны удовлетворять согласно законоположению следующим требованиям: 1) быть полученными от здоровых животных; 2) выстояться не менее 4 месяцев и быть прозрачными; 3) не содержать консервирующих веществ больше допущенного максимума, напр. i/a% Для фенола; 4) не содержать посторонних частиц (легкий осадочек и муть у стоявших некоторое время в ампулах С. допускаются); 5) быть вполне стерильными; 6) быть безвредными для мелких лабораторных животных; 7) не преципитировать человеческий белок (пре-цшштирующие С. отпускаются с ограничением их применения, для чего на коробку наклеивается указание «внутривенно не вводить»); 8) содержать указанное на этикетке количество единиц антител. Срок годности С. при хранении ее в ампулах при низкой t° (от 0 до + 6°) принимается равным для данного титра одному году. При большем хранении титр снижается, процент снижения принимают равным в среднем 10% в год. Долго стоявшие в ампулах (особенно из щелочного стекла) С. вследствие продолжающегося процесса выпадения белков постепенно мутнеют и образуют хлопчатый осадок. Такие С. годны для употребления, если муть (resp. осадок) не слишком велика. При употреблении таких С. осадок не должен взбалтываться, как состоящий из белков, не несущих активных лечебных свойств. С, предназначаемые к употреблению для ветеринарных целей, разливаются обычно в более крупную посуду. В отношении их не обязательно предварительное выстаивание, проба на безвредность и преципитацию. Допускается кроме того некоторыми законодательствами так наз. условная стерильность (содержание в 1 см3 до 100 колоний непатогенных микроорганизмов). Очищение иконцентрацня С. Составляющий С. белок не однороден, путем высаливания нейтральными солями он может быть разделен па несколько фракций, обладающих различными свойствами. Главнейшие из этих фракций—глобулины и альбумины. В свою очередь глобулины могут быть искусственно подразделены на фибрин-глобулин, эу-глобулин, псевдоглобулин. Давно уже установлено, что активные иммунные свойства С. связаны не со всеми фракциями сывороточного белка, а лишь с одной его фракцией—именно глобулинами (преимущественно псевдоглобу-лннами). Это дало возможность употреблять для лечения вместо целой С. только ее активную, несущую антитела белковую фракцию. Она отделяется от остальных фракций, т. н. пассивных или балластных белков, искусственным лабораторным путем. Такие препараты носят название очищенных, или концентрированных С. Нек-рыми иностранными институтами они выпускаются под наименованием «антитоксина» (дифтерийного, столбнячного и т. д.). За границей очищенные сыворотки выпускаются и применяются довольно широко. Преимуществами их являются гораздо менее выраженная, а во многих случаях и совсем отсутствующая сывороточная реакция на впрыскивание (сывороточная б-нь), меньшее анафилактоген-ное действие, лучшее и более быстрое рассасывание при впрыскивании, отсутствие помутнения при стоянии и наконец при одновременной с очищением концентрации—уменьшение объема вводимой С. С точки зрения производственной очищенные С. имеют то преимущество, что они могут быть выпущены без предварительного длительного выстаивания. Очистка С. влечет за собой дополнительные затраты и иногда значительную потерю антител, поэтому стоимость очищенных С. значительно выше. Недостатком очищенных С. при некоторых способах их очищения является усиленная реакция при внутривенном введении. Производство очищенных и концентрированных С. освоено недавно, массовый их выпуск насчитывает лет 15—20. Самые способы очищения С. от балластных белков обычно сочетаются с концентрацией антител. Способы эти разнообразны. Принятые в ин-тах буржуазных стран, они часто не опубликовываются, составляя фабричный секрет. В принципе чаще всего применяются способы высаливания нейтральными солями С. (Na2 S04) или плазмы (NH4) S04. Определенной концентрацией этих содей осаждается и затем удаляется фильтрованием эугло-булиновая часть сывороточного глобулина. Сле- дующей порцией соли в осадок переводится псевдоглобулиновая фракция, от к-рой отфильтровывается не несущий активных антител сывороточный альбумин. Осадок псевдоглобулина в дальнейшем растворяется тем или иным способом в физиол. растворе соли или в воде, подвергается диализу для удаления избытка соли, затем разводится физиол. раствором до нужной концентрации белка и антител и стерилизуется фильтрованием через бактериальные фильтры (свечи, прибор Зейца) (рис. 5).

Рисунок 5. Прибор Seitz'a для фильтрации сывороток.

Применяется также способ концентрации при помощи элсктродиадиза (пропускание через С. постоянного тока и одновременный диализ проточной водой). При этом способе благодаря удалению из С. электролитов и нарушению электрического состояния коллоидной системы белков С. на электродах отлагаются осадки различных фракций белка. Этот способ требует сложной аппаратуры. Другие способы осаждения и разделения белков С. по техническим условиям в производственных условиях мало приемлемы. Таковы напр. осаждение С. путем обработки ее дест. водой и насыщением углекислым газом, осаждение этиловым алкоголем на холоду (давшее в экспериментальных условиях по отношению к пек-рым антибактериальным С. хорошие результаты).— Основным требованием, предъявляемым к очищенным и концентрированным С., является требование неповышения сверх установленных норм процентного содержания общего белка в конечном продукте. Способы концентрации С, основанные на концентрировании антител вместе с концентрацией всего белка сыворотки без удаления пассивных фракций его (вымораживание, выпаривание и др.), не изменяя в сущности ничего в составе С, вводят в заблуждение употребляющих С. врачей и в большинстве стран и у нас в СССР запрещены законом. Остальные требования по отношению к очищенным С. те же, что и в отношении С. нативных (см. выше). Обработка, испытание и разливка очищенных С. производятся так же, как и неочищенных. Перечень и краткаяхаракте-ристика существующих сывороток. До наст, времени изготовлены и применяются с лечебно-профилактическими целями в медицинской практике следующие С.: 1. Дифтерийная С.—самая старая и самая распространенная, положившая начало всей серотерапии. Лечебная эффективность несомненна, применение при установлении диагноза диф- терии надо считать обязательным. Точно титруется на морских свинках. 2. Столбняч-н а я—при профилактическом применении действует безотказно даже в малых дозах (3 000 международных единиц). При лечении уже развившегося столбняка недостаточно активна; лучший эффект при внутриспишюмозговом применении. Точно титруется на животных. 3. Менингококковая (эпидемический церебро-спинальный менингит)—старая С. с различными отзывами об эффективности. Изготовленная из местных штаммов менингококка, при правильном применении (введение в спинномозговой канал повторно плюс внутримышечные инъекции) должна обладать несомненной лечебной активностью. В последнее время в иммунизацию с успехом введены токсические фильтраты бульонных культур менингококка. Способов титрования до сих пор не имеет. 4. Скарлатинозна я—изготовлена, иммунизацией так наз. скарлатинозным гемолитическим стрептококком. Наиболее активна антитоксическая С. (Диков) при токсических формах скарлатины. При септических формах менее эффективна. Титруется внутрикожно на козах, кроликах и методом фдокуляции. 5. Стрептококковая антибактериальная, иногда антитоксическая С. Чаще выпускается поливалентная, изготовленная путем иммунизации стрептококками различного происхождения (септическими, рожистыми, пуерперально-септическими, хирургическими, скарлатинозными, ангинозными и др.). Иногда отпускаются моновалентные С. Применяется в больших дозах. Лечебная эффективность в общем может считаться доказанной. Никакого способа титрации не имеет. 6. Дизентерийная— поливалентная С, полученная иммунизацией культурами дизентерийной палочки Флекснера, Гисса, Стронга и токсином штамма Шига. При своевременном применении вполне эффективна, особенно при токсических формах дизентерии. Титруется с большой точностью (белые мыши). 7. Г ангреноз-н а я—против возбудителей т. н. газовой гангрены, т. е. В. perfringens, oedematis maligni, histolyticus и V. septique. Выпускается раздельно, смешивается при инъекции в нужном соотношении различных типов (40% perfringens, 30% oedematiens, 20% histolyticus, 10% V. septique).-Изготовлена недавно (со времени мировой войны), получает все большее признание и распространение. Титруется довольно точно на животных (мыши, свинки). Лечебно-профилактическая эффективность —• несомненна. Применение С. не исключает хир. лечения раны. 6. Ботулиническа я—чисто токсическая С, несомненно эффективная в экспериментальных условиях'И при раннем лечебном применении. Менее эффективна при лече--нии развившегося ботулизма. Точно титруется. 9. Пневмококкова я—широко распространена в Англии и Америке, приготовляется по отношению к пневмококкам I и II типа (к III типу получить не удается). Титруется до-вол г>но точно на мышах. Применяется с хорошим эффектом при лобарной пневмонии, вызванной диплококком Френкеля I и II типов. Выпускается как поливалентная, так и моновалентная С. 10. Брюшнотифозна я— мало распространена, по отзывам некоторых авторов эффективна в лечебном отношении. 11. Гонококковая антибактериальная С.—спорной эффективности. 12. Сибиреяз- венная, получается по принципу антибактериальной С, применяется с успехом у человека и животных. 13. Противочумная С.—антибактериальная, по признанию большинства авторов обладает лечебным действием при бубонной форме чумы.—С. против стафилококков, холеры, сыпного тифа, tbc, анти-рабичоская предлагались некоторыми авторами, однако пока признания и распространения не получили. Нормальные С. Применение с лечебной целью нормальных С, т. е. С, полученных от животных, не подвергавшихся искусственной иммунизации, распространено довольно широко. Оно основано на принципах белковой терапии раздражения (Reiztherapie). Проводится такая терапия при хронич. инфекциях гонококкового происхождения, при роже, при хрон. суставном ревматизме, при кожных поражениях—экземе, псориазе и др. Прочно завоевало себе место применение нормальной лошадиной С. как кровоостанавливающего средства при острых кровотечениях и токсикозах беременности (см. Серотерапия).—С ы в о р о т -к и реконвалесцентов. К разряду лечебно-профилактических С. относятся также т. н. С. реконвалесцентов, т. е. полученные от людей, естественнымобразомпереболевших данным заболеванием, и обладающие защитноле-чебными свойствами. Широко распространена из таких сывороток коревая сыворотка Дег-квица, дающая при применении ее в порядке «серовакцинации», т. е. впрыскивании в точение первых дней инкубации (до 3—4-го дня), хороший профилактический эффект и не активная при применении при уже развившейся кори. Кроме того употребляются для лечебно-профилактических целей с хорошими результатами также реконвалесцентная скарлатинозная и коклюшная С. Реконвалесцентные С, как полученные от естественным образом иммунизировавшегося человека, являются как правило менее активными, чем С, полученные от гипер-иммунизированного животного, зато они имеют то преимущество, что, будучи С. человеческими, не вызывают явлений сывороточной б-ни. Кроме того по отношению к тем б-ням, против которых не получено С. от животных (корь), реконвалесцентная С. является единственным средством лечения или профилактики. В редких случаях употребляются С. (иногда цельная кровь) от искусственно иммунизированных людей. Таковы напр. описанные случаи лечения endocarditis lonta сывороткой или кровью человека, подвергнутого нек-рому курсу инъекций вакциной зеленого стрептококка, выделенного от больного. Употребление иммунных С. в смеси с антигенами для целей активной иммунизации. Недавно еще довольно широко было распространено употребление иммунных С. для целей активной иммунизации в виде смесей с антигеном для его обезвреживания. Таковы широко известные нейтральные, гипо- или гипернейтральные смеси токсина с антитоксином для профилактики дифтерии, при иммунизации против столбняка (в ветеринарной практике) и др. Этим препаратам, как содержащим С, свойственны нек-рые недостатки: во-первых в силу наличия белка они могут быть несколько анафилактогенны, во-вторых имеются указания на возможность разрушения связи токсина с антитоксином и освобождения первого, что делает препарат токсическим. В наст, время нейтральные смеси почти целиком вытеснены препаратами анатоксина (см.). Применяется также обработка иммунной С. живых или убитых микробных вакцин, предназначенных для иммунизации преимущественно животных. Это т. н. сенсибилизированные вакцины Безредка. С. в этих случаях понижает токсичность и агрессивность культуры и тем самым облегчает течение иммунизации и улучшает ее результаты. Сыворотки диагностические. Строго специфическое действие иммунных С. на соответствующий антиген позволяет пользоваться ими как для целей точного распознавания вида микробов или чужеродного белка, так и для диагностики различных инфекционных заболеваний (см. Серодиагностика). Наибольшее применение здесь находят те С. к-рые дают реакции иммунитета с антигеном in vitro—• аглютинацию, преципитацию, реакцию связывания комплемента, гемолиз, специфическую флокуляцию. Малоудобны для целей диагностики антитоксические и бактерицидные С; однако могут быть использованы и они. Предназначаемые для целей диагностики т. н. диагностические сыворотки готовятся отлично от лечебных с обращением внимания на высокое развитие в-них способностей давать то реакции иммунитета, к-рыми пользуются для диагностики и к-рые могут быть несущественны с точки зрения лечебной активности С. (преципитация, гемолиз, аглютинация). Изготовление диагностических С. производится в гораздо меньших масштабах, чем лечебных в виду того, что эти С. идут в реакции в весьма малых объемах. В большинстве случаев эти С. готовятся на мелких животных, гл. обр. кроликах, к-рые к тому же весьма способны к выработке высоких титров преципитирующих, аглютини-рующих и гемолитических свойств. При больших размерах исследовательской работы (эпидемии) иногда приготовляют диагностические С. и на лошадях. Методы иммунизации животных и взятия крови — см. Преципитация, Иммунизация, Гипериммунизация. Кровь ставится для свертывания на несколько часов в термостат, сгусток обводится тонкой стеклянной палочкой для отделения от стенок сосуда, и через 1—2 суток сыворотка пипеткой отсасывается в другой сосуд (кодбу), куда добавляется консервирующее вещество (фенол, хлороформ, хинозол). По мере надобности С. разливается по ампулам (обычно мелким—1 ел3) или высушивается (см. ниже). Перед разливкой устанавливается точный соответствующий (аглюти-национный, преципитирующий) титр С. и она выпускается с его обозначением. Стерильность диагностической С. нужна только для предохранения ее от порчи, поэтому требования в этом отношении к диагностическим С. значительно менее строги, чем к лечебным.—Важно отметить высокую лябильность титров диагностических С—обстоятельство, требующее оптимальных условий для их хранения (t°, свет). Весьма часто диагностические С. для лучшего сохранения титра подвергаются высушиванию. Высушивание производится в чашках Петри в обычных хим. эксикаторах над поглощающими влагу веществами (серная кислота, хлористый марганец, фосфорный ангидрид) при вакууме и повышенной t° (термостат). Титр высушенной С. должен быть определен по ее растворении в условиях,' соответствующих условиям ее применения. Наиболее употребительной из диагностических реакций в практике микробиол. лабораторий является реакция аглютинации. Для реакции берутся два компонента—С. и взвесь микробов. Чаще всего реакция ставится в небольших т. н. аглютинационных пробирочках, но может быть проведена и просто на предметном стекле или в висячей капле (микроаглютина-ция). При постановке в пробирочках в них наливается по 1 см3 повышающихся разведений С. и затем добавляется по 2—3 капли эмульсии испытуемых (живых или убитых нагреванием) микробов (смыв с агара). Контрольная пробирка С. не содержит. После встряхивания пробирки ставятся в термостат при 37° на 1—2 часа, после чего отсчитываются на темном фоне при помощи лупы, а также аглютинескопа (см. Агглютинация) результаты реакции (образование б. или м. крупных хлопьев или зернистости). Окончательные результаты реакции отсчитываются через 12—18 часов стояния при комнатной t°. Контрольная пробирка не должна давать никакой аглютинации. Близкие по своему положению микробы дают неспецифическую групповую реакцию, однако на значительно меньшие разведения, чем специфический штамм (тиф и паратифы А—В). Весьма употребительная также в лабораторной практике реакция преципитации (см.) ставится также в небольших пробирочках. Сперва наливается во все пробирки определенное разведение специфической С. и на него осторожно наслаиваются повышающиеся разведения испытуемого материала. При положительной реакции на месте соприкосновения жидкостей быстро образуется беловатомутное кольцо. Реакция чрезвычайно чувствительна, высоко специфична и широко употребляется за пределами микробиологических лабораторий (пищевая санитария, судебная медицина, археология).—Третья основная диагностическая реакция иммунитета — реакция отклонения, resp. связывания (фиксации), комплемента—см. Борде-Жангу реакция. Она более сложна по своему принципу и технике постановки. На принципе этой реакции построена реакция Вас-сермана на сифилис, реакция связывания комплемента на сап, на эхинококк и многие другие. Технически реакция ставится в пробирочках. К смеси испытуемой С, инактивирован-ной нагреванием при 56° 1 час (для устранения собственного комплемента), со специфическим антигеном прибавляется определенное количество строго титрованного комплемента. После стояния в термостате прибавляется вторая система—смесь эритроцитов с соответствующей гемолитической С. Общая смесь опять ставится в термостат, а затем на ледник. Результаты отсчитываются на другой день. По степени гемолиза определяется сила реакции, отмечаемая различным числом крестов. Лит.: Руководство по вакцинному и сывороточному делу, под ред. Н. Власьевского, В. Любарского и Л. Ха-теиевера, Ж,—Л., 1934 (лит.); Handbuch der norm. u. pa-thol. Physiologie, herausgegeben y. A. Bethe, G. Berg-mann u. a., B. VІ, T. 1—2 — Blut u. Lymphe, В., 1928. См. также литературу к ст. Гематология, Иммунитет, Кровь и Стандартизация бактерийных препаратов и сывороток.                                    Н. Власьевский, Е. Гогин.

Большая медицинская энциклопедия. 1970.